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    食品大肠菌群检测常见问题

    发布时间: 2022-06-16  点击次数: 255次

    常用标准

    (1)GB/T 4789.3-2003 食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定

    (2)GB 4789.3-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数

    (3)GB 4789.28-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求

    (4)GB 4789.1-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 总则

    (5)GB 4789.41-2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 肠杆科检验

    (6)GB/T 27405-2008 实验室质量控制规范 食品微生物检测

    (7)GB/T 16294-2010 医药工业洁净室(区) 沉降菌的测试方法

    常见问题及解答

    1、食品中大肠菌群的检测有两个标准三种方法,该如何选择呢?

    A:依据产品标准的项目单位

    1.1 若单位为CFU/g,则选择GB 4789.3-2016第二法(平板计数法)

    1.2 若单位为MPN/g,则选择GB 4789.3-2016第一法(MPN计数法)

    1.3 若单位为MPN/100g,则选择GB/T 4789.3-2003。

    2、MPN法3个适宜的连续稀释度该怎样选择?

    A:依据产品标准的项目标准值

    2.1 若标准值为<3.0MPN/g,则选择0.1g、0.01g、0.001g三个稀释度。

    2.2 若标准值为≤30MPN/100g,则选择1g、0.1g、0.01g三个稀释度。

    样品采集

    怎样采样,才能使样品具有代表性?

    这里将样品分为两类:预包装食品和散装食品或现场制作食品

    (1)对于预包装食品

    ① 应采集相同批次、独立包装、适量件数的食品样品,每件样品的采样量应满足微生物项目检验的要求。

    ② 独立包装小于、等于1000g 的固态食品或小于、等于1000mL 的液态食品,取相同批次的包装。

    ③ 独立包装大于1000mL 的液态食品,应在采样前摇动或用无菌棒搅拌液体,使其达到均质后采集适量样品,放入同一个无菌采样容器内作为一件食品样品;大于1000g 的固态食品,应用无菌采样器从同一包装的不同部位分别采取适量样品,放入同一个无菌采样容器内作为一件食品样品。

    (2)对于散装食品或现场制作食品

    用无菌采样工具从 n 个不同部位现场采集样品,放入 n 个无菌采样容器内作为 n 件食品样品。每件样品的采样量应满足微生物项目检验单位的要求。

    培养基制备过程容易出现问题解答

    1、异常现象一:培养基不凝固

    原因分析:

    ①制备过程中过度加热;

    ②低pH造成培养基酸解;

    ③称量不正确;

    ④琼脂未*溶解;

    ⑤培养基成分未充分混匀。

    2、异常现象二:pH不正确

    原因分析:

    ①制备过程中过度加热;

    ②水质不佳;

    ③外部化学物质污染;

    ④测定pH时温度不正确;

    ⑤pH计未正确校准;

    ⑥脱水培养基质量差。

    3、异常现象三:颜色异常

    原因分析:

    ①制备过程中过度加热;

    ②水质不佳;

    ③pH不正确;

    ④外来污染;

    ⑤脱水培养基质量差。

    4、异常现象四:产生沉淀

    原因分析:

    ①制备过程中过度加热;

    ②水质不佳;

    ③脱水培养基质量差;

    ④pH计未正确控制。

    5、异常现象五:培养基出现抑制/低的生长率

    原因分析:

    ①制备过程中过度加热;

    ②脱水培养基质量差;

    ③水质不佳;

    ④使用成分不正确,如:成分称量不准,添加剂浓度不正确;

    ⑤制备容器或水中的有毒残留物。

    6、异常现象六:选择性差

    原因分析:

    ①制备过程中过度加热;

    ②脱水培养基质量差;

    ③配方使用不对;

    ④添加成分的加入不正确,例如加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误;

    ⑤添加剂污染。

    7、异常现象七:污染

    原因分析:

    ①不适当的灭菌;

    ②无菌操作技术存在问题;

    ③添加剂污染。

    实验过程

    1、平板法VRBA倾注完,待琼脂凝固后为什么需要加3-4mL的覆盖层?

    A:因为大肠菌群是需氧及兼性厌氧的,再加一层琼脂相当于造就一个半厌氧环境,促进兼性厌氧菌的生长,同时抑制其他菌的生长。除此之外,还有防止菌落蔓延的作用,防止迁徙性菌落对菌落计数构成影响。例如一些变形杆菌就会有迁徙现象,从而导致菌落长成一片无法区分。在表面多覆盖一层培养基就可以避免这种情况的发生。

    2、GB 4789.3-2016平板法验证菌落如何挑取?

    A:分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落数。按比例挑取10个不同类型的典型和可疑菌落,少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落。假如在1:10的平板上可疑大肠菌群有10个,典型大肠菌群有6个。证实实验应该按照可疑跟典型5:3的比例进行挑取,移种于BGLB肉汤管内。

    结果处理

    1、所有稀释度都不在计数范围内怎么办?

    这种情况一般都是低稀释度的平板都小于15CFU,这种情况就是以低稀释度的平板菌落数乘以验证试验的比例来计算。例如10倍稀释的两个平板上菌落数分别为10、8,菌落数为10的平皿挑取10个菌落复发酵中有8个菌落产气,菌落数为8的平皿挑取8个菌落复发酵中有7个菌落产气,则计算过程是这样的:(10*8/10+8*7/8)/2*10=75CFU/g(mL)。

    2、连续两个稀释度的四个平皿的菌落数都在计数范围内怎么办?

    这个需要参考菌落总数检测国标里7.1.2里的公式计算。我们需要先计算每个平皿的验证后的菌落数,再代入公式计算即可。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为120和125,100倍稀释度两个平皿的菌落数为17和16,经过复发酵验证产气的管数分别为7、8、8、8,则我们先计算每个平皿上的菌落数分别为120*7/10=84,125*8/10=100,17*8/10=13.6(我们计14),16*8/10=12.8(我们计13),然后将84、100、14、13四个数代入公式:(84+100+14+13)/(2+0.2)*10=959,结果应报告960CFU/g(mL)。

    3、只有一个稀释度的一个平皿的菌落数在计数范围,其他均不在计数范围怎么办?

    这样我们只需要复发酵验证这一个平皿即可,根据这一个平皿的菌落数进行报告。例如10倍稀释度两个平皿菌落数为160和142,100倍稀释度两个平皿的菌落数为12和13,则我们只需要从菌落数为142CFU的平皿里挑取10个菌落进行复发酵验证即可,假如共有7支发酵管阳性,则应计算142*7/10=99.4,结果报告990CFU/g(mL)。

    注意:对于结果检出的平板或试管需要经过无害化处理(121℃灭菌30分钟)方能弃去,防止对环境造成污染。


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